技術(shù)原理：以SNP分型檢測為例，在PCR過程中，兩個探針能與正向引物和反向引物之間的互補序列特異退火結(jié)合。當探針以完整形式存在時，由于能量共振轉(zhuǎn)移，熒光基團只發(fā)出微弱熒光。特異的探針與相應(yīng)的等位基因雜交后，DNA聚合酶發(fā)揮5’外切酶活性，把報告熒光基團切割下來，從而發(fā)出熒光；而SNP探針的錯配形式不會引起切割，無熒光信號。MGB分子結(jié)合到DNA螺旋小溝，通過穩(wěn)定MGB探針/模板提高雜交穩(wěn)定性，使短至13個堿基的探針獲得高錯配區(qū)分辯別能力。MGB探針包括一個不發(fā)熒光的淬滅基團（NFQ），極大消除傳統(tǒng)淬滅基團產(chǎn)生的背景熒光，提高信噪比，從而提高檢驗靈敏性。
原理及流程示意圖：
技術(shù)優(yōu)勢：
1. 采用最先進的ABI 7900HT系統(tǒng)采用激光掃描并激活96/384孔板每個反應(yīng)孔的熒光染料，熒光信號通過光柵分光，經(jīng)過分離的多色熒光同時到達CCD攝像機，實現(xiàn)多色熒光同時檢測。
2. 采用ABI 專利技術(shù)的TaqMan-MGB 探針：MGB探針包括一個不發(fā)熒光的淬滅基團（NFQ），極大消除傳統(tǒng)淬滅基團產(chǎn)生的背景熒光，提高信噪比，從而提高檢驗靈敏性，另外MGB(小溝結(jié)合物)增加Tm值，使探針設(shè)計產(chǎn)度縮短至約15bp，提高了探針設(shè)計的靈活性。
技術(shù)特點：
1. 適合位點少，樣本通量高的檢測，每個位點需要合成一對探針，探針合成費用高；
2. 應(yīng)用ABI7900、ABI7500定量PCR儀進行定量檢測；
3. 操作簡便，只需一步 PCR 反應(yīng)，無須純化和預(yù)處理，直接上機檢測；
4. 結(jié)果清晰，軟件分析結(jié)果界面友好，標出每個樣本的基因型及熒光強度，非常直觀；
適用范圍：特別適合樣本數(shù)量超過1500個以上，位點數(shù)量比較少的SNP分型。
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客戶需要提供：
1. 細胞，組織或血液等樣品材料，基因組DNA提取費用單獨收費；
2. 基因組DNA（體積≥30μl，濃度≥50 ng/μl），純度 OD260/280 為1.7～1.9之間；
3. 人類基因組需提供SNP位點的RS號。其它物種如牛、雞、魚等無rs號的，需提供SNP位點上下游各200bp的確切序列，SNP位點的突變類型，以及位點的上下游25bp內(nèi)是否存在其它連鎖位點。
最終提交結(jié)果：
1. SNPs結(jié)果（ExceL表格）；
2. 完整實驗報告：擴增和反應(yīng)體系、所涉及的引物、探針序列；
想咨詢了解更多關(guān)于Taqman-MGB探針法SNP分型技術(shù)和收費，請電話或郵件聯(lián)系我們！
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