產(chǎn)品中心

海洋動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)

Marine Animal DNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

一.產(chǎn)品介紹：

獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

二.適用范圍：
    適用于快速提取各種海洋動(dòng)物組織基因組DNA。

三.儲(chǔ)存條件：
1.結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.為避免降低活性、方便運(yùn)輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1ml滅菌水溶解，因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。
3.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

四.注意事項(xiàng)：
洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

五.操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
   提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1.切取不多于30mg 的組織材料，放入裝有180μl組織裂解液SL的1.5ml離心管中，渦旋振蕩15 秒。
  根據(jù)提取的組織不同，起始量也稍有不同，腮的細(xì)胞量較大，一般建議提取量不超過20mg。如果裂解困難，可先用液氮研磨。

2.加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。將裂解物放置在55℃水浴1-3小時(shí)或者直到組織消化完全。
不同組織裂解時(shí)間不同，通常需0.5–2小時(shí)即可完成。扇貝組織0.5小時(shí)基本可裂解完全，蝦和魚類組織1小時(shí)。每小時(shí)振蕩混合樣品2-3次，每次振蕩混勻15 秒。
可選做步驟: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可在完成步驟2后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。

3.加入200μl 結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。

4.冷卻后加100μl 異丙醇，充分顛倒或渦旋振蕩充分混勻，此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀。

5.將上一步混合物和可能的沉淀都加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液。
如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去，該做法是為了去除不溶物，以          免堵 塞離心柱。
上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴(yán)重降低產(chǎn)量，必要時(shí)如樣品粘稠不易混勻時(shí)可以渦旋振蕩15秒混勻。

6.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

7.加入600μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9.將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10.取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。

11.DNA可以存放在2-8℃，如果要長時(shí)間存放，可以放置在－20℃。