產(chǎn)品中心

大量全血基因組DNA提取試劑盒(溶液型)

Maxi Blood DNA Isolation Kit(Solution)

包裝規(guī)格：

一. 產(chǎn)品介紹：

本試劑盒根據(jù)全血特點(diǎn)采用幾個(gè)快速步驟提取基因組DNA，首先紅細(xì)胞裂解液裂解去除不含DNA的紅細(xì)胞，細(xì)胞核裂解液裂解白細(xì)胞釋放出基因組DNA， 然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過(guò)異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液，操作步驟簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)成本低，產(chǎn)量高，純度好，適合各種下游實(shí)驗(yàn)。

二. 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.從十幾個(gè)配方中優(yōu)選出的紅細(xì)胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等試劑。
3.快速，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在60分鐘內(nèi)完成。
4.結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（典型的產(chǎn)量10ml全血可提取出150-500μg），OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá)50Kb-150kb，可直接用于構(gòu)建文庫(kù)、PCR、Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

三. 適用范圍：
適用于快速提取各種動(dòng)物全血基因組DNA。

四. 試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存18個(gè)月不影響使用效果。

五. 儲(chǔ)存事項(xiàng)：
1.環(huán)境溫度低時(shí)細(xì)胞核裂解液中某些去污劑成份會(huì)析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要?jiǎng)×覔u晃，以免形成過(guò)量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。
3.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

六. 注意事項(xiàng)
1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到2500 x g， 4000rpm以上，并配備容納50ml離心管轉(zhuǎn)頭的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)。
2.建議采用PP材質(zhì)，可高溫高壓滅菌，50ml直口圓底離心管，不用擰螺旋蓋，方便開(kāi)蓋，在本實(shí)驗(yàn)中，直口圓底離心管方便清洗，經(jīng)過(guò)多次漂洗消毒滅菌，可重復(fù)使用，降低實(shí)驗(yàn)成本。   
3.用戶需自備異丙醇和70％乙醇。
4.典型的產(chǎn)量10ml全血可提取出150-500μg 基因組DNA，不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。
5.溶液型全血基因組DNA提取方法，可以很容易的按照比例擴(kuò)大或者縮小每次處理的全血量（20μl-10ml），需要具體產(chǎn)品操作說(shuō)明，請(qǐng)聯(lián)系我們索取不同處理量的操作說(shuō)明書(shū)。
6.本試劑盒可運(yùn)用于多種抗凝劑的全血，如EDTA、檸檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白細(xì)胞沉淀團(tuán)很難打散重懸，影響裂解效果，建議選用非肝素的抗凝劑收集血液標(biāo)本。
7.為了最佳效果，最好使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放小于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過(guò)3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。
8.對(duì)于每個(gè)樣品提取血量大或者用量大的客戶，可以和我們聯(lián)系，我們另外專門準(zhǔn)備有優(yōu)惠的大包裝試劑。

七. 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）
本試劑盒為溶液型，可按照比例擴(kuò)大或縮小每次處理的全血量（20μl-10ml）

1.吸取25ml 1x紅細(xì)胞裂解液（需要先稀釋到1x）到一個(gè)50ml離心管。使用前應(yīng)該用去離子水將10x紅細(xì)胞裂解液稀釋10倍到1x。

2.將抗凝全血（使用前回復(fù)到室溫）顛倒混勻后，吸取10ml全血加到上步裝有紅細(xì)胞裂解液的50ml離心管中，顛倒6-8次，并倒置輕彈管壁，確保充分混勻。

3.室溫放置10分鐘，期間顛倒混勻6-8次，也可放在漩渦震蕩儀或搖床上震蕩混勻幫助裂解紅細(xì)胞。

4.2500 x g，4000rpm臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘，倒棄紅色上清，在吸水紙上倒扣離心管吸凈管口殘留的血液。

   可選步驟，再加入3-5ml紅細(xì)胞裂解液上下顛倒幾次，靜置1-2分鐘，2500 x g，4000rpm離心2分鐘，之后倒棄紅色上清，兩次紅細(xì)胞裂解DNA純度更好。

5.加入10ml細(xì)胞核裂解液用巴氏吸管迅速有力的上下吹打5-10次以裂解白細(xì)胞（吹散白細(xì)胞團(tuán)步驟非常重要，不可省略），然后在60-65℃水浴鍋或烘箱中恒溫放置30-60min左右，具體時(shí)間看白細(xì)胞裂解狀況而定。
  備注：劇烈渦旋震蕩和迅速吹打可以幫助細(xì)胞核裂解液和白細(xì)胞接觸并裂解，由于基因組DNA立刻釋放出來(lái)，混合物會(huì)馬上變得十分粘稠，就應(yīng)停止吹打，以免剪切斷基因組DNA。

6.可選步驟，一般不需要：在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至終濃度30μg/ml，顛倒25次混勻，37℃溫育15分鐘去除殘留RNA，然后冷卻回室溫。

7.將所有離心管從水浴鍋或烘箱中從取出，加入3.33ml蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻25秒，混勻后可能見(jiàn)到一些小的蛋白團(tuán)塊，也可以用巴氏吸管迅速有力的上下吹打5-10次，這樣混勻效果更好。

8.2500 x g，4000rpm離心5-10分鐘。這時(shí)候應(yīng)該可以見(jiàn)到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能見(jiàn)到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。

9.小心吸取或者倒出上清（約10-12ml）到一個(gè)新的50ml離心管中。吸取上清時(shí)，注意不要吸到管底和漂浮在液體表面的蛋白沉淀，如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。

10.加入等體積的室溫異丙醇10-12ml，輕柔顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)棉絮狀（絲狀）白色DNA沉淀。
可選方案：DNA轉(zhuǎn)移結(jié)束后將50ml離心管上標(biāo)記的編號(hào)用異丙醇擦凈，倒掉離心管中的溶液，然后將管子泡在放有消毒片或洗衣粉的塑料桶里浸泡半天后，將離心管用自來(lái)水沖洗刷凈，再用84消毒液浸泡一天，之后多次用清水漂洗，最后高壓滅菌重復(fù)使用。 

11.用黃槍頭吸取DNA沉淀轉(zhuǎn)移到潔凈的1.5ml EP管中，并吸凈上清液。加入300-500μl 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，也可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。注意不要干燥過(guò)頭，否則DNA極其難溶，也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。

12.加入100-500μl DNA溶解液重新溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65℃溫育30-60分鐘（不要超過(guò)一小時(shí)），期間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化DNA。也可以在室溫或者4℃放置過(guò)夜來(lái)重新水化DNA。

13.DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃。