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FFPE石蠟包埋組織RNA提取試劑盒(離心柱型)

FFPE Tissue RNA Extraction Kit(Column)

包裝規(guī)格：

FFPE石蠟包埋組織RNA提取試劑盒(離心柱型)，適用于快速從福爾馬林固定、石蠟包埋組織樣品中提取總RNA?？稍?0分鐘左右，無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑，采用獨特的裂解液可以迅速裂解細(xì)胞，結(jié)合高效的gDNA 過濾技術(shù)，可高效去除基因組DNA，結(jié)合多次柱漂洗的方式，可提取沒有蛋白、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構(gòu)建cDNA文庫等各種分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點：
無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。
特殊性：適用于提取石蠟包埋組織的總RNA。
易操作：操作簡便，提取過程僅需 60 分鐘左右。 
安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機(jī)試劑。
吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。
高質(zhì)量：有效保證RNA的完整性，回收RNA 效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質(zhì)污染。OD260/OD280的比值可達(dá)1.8~2.2，可用于各種分子生物學(xué)實驗。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項） 
樣品處理： 
1.修整去除過量包埋組織外石蠟，并切片成5~20μm厚切片（開始的2~3片拋棄不用）。
2.收集總厚度不超過40μm的石蠟切片到一個1.5~2ml離心管（例如2片20μm、4片10μm、8片5μm的石蠟切片）
3.加入1ml 100%二甲苯，渦旋振蕩10秒。立即短暫離心，把樣品組織全部浸入到二甲苯。
4.50°C水浴3分鐘，20°C~25°C最高速離心2分鐘，收集組織到管底。
5.小心用移液器吸棄上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。
6.加入1ml無水乙醇，渦旋振蕩，最高速離心2分鐘，吸棄上清乙醇，注意不要吸到沉淀
7.重復(fù)步驟6一次。
8.室溫或者37°C 晾干乙醇10分鐘或直到所有乙醇揮發(fā)干。

提取步驟：
1.加入150μl裂解液PKD中，重懸吹打或者渦旋振蕩充分重懸組織沉淀，短暫離心收集上清液體，加10μl 蛋白酶K，吹打混勻。
2.55°C孵育15分鐘，然后80°C孵育15分鐘。
55°C孵育后，可以將離心管取出放置在室溫，等水浴鍋溫度升到80°C后再放入水浴鍋，精確的孵育15分鐘。
3.加入320μl結(jié)合液RBC，充分吹打混勻調(diào)節(jié)結(jié)合條件。立刻將混合溶液轉(zhuǎn)入一個套有基因組DNA清除柱的離心管中， 14,000 rpm離心60秒，保留濾過液（RNA在濾過液中）。
4.加入720μl無水乙醇到濾過液中，立即吹打混勻，不要離心。
5.將混合溶液（每次小于700μl，可分兩次加入）轉(zhuǎn)入套有吸附柱RA的離心管中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心30秒，棄掉廢液。
6.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。
7.重復(fù)步驟7一遍。
8.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
9.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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