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常溫等溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)品 介紹：點(diǎn)擊進(jìn)入

Basic	Basic常溫恒溫DNA快速擴(kuò)增酶，用于DNA擴(kuò)增，電泳檢測(cè)
Exo	Exo常溫恒溫DNA快速擴(kuò)增酶，用于DNA擴(kuò)增，熒光檢測(cè)
nfo	nfo常溫恒溫DNA快速擴(kuò)增酶，用于DNA擴(kuò)增，試紙條檢測(cè)
RT-Basic	RT-Basic常溫恒溫RNA快速擴(kuò)增酶，用于RNA擴(kuò)增，電泳檢測(cè)
RT-Exo	RT-Exo常溫恒溫RNA快速擴(kuò)增酶，用于RNA擴(kuò)增，熒光檢測(cè)
RT-nfo	RT-nfo常溫恒溫RNA快速擴(kuò)增酶(核酸試紙條型)，用于RNA擴(kuò)增，試紙條檢測(cè)
LFD	一次性核酸檢測(cè)試紙條/可視化核酸檢測(cè)試紙條/橫向流動(dòng)試紙條LFD

RPA是什么？

基本原理:
重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）技術(shù)，在恒溫37-42℃條件下，模擬體內(nèi)核酸復(fù)制機(jī)制，由各種蛋白酶參與，幫助DNA聚合酶復(fù)制DNA，以實(shí)現(xiàn)DNA的等溫?cái)U(kuò)增，反應(yīng)產(chǎn)物以指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)，整個(gè)反應(yīng)一般在20-30min內(nèi)獲得可以檢測(cè)水平的產(chǎn)品。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非?？?，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。

Isothermal amplified detection of DNA and RNA

 

本技術(shù)平臺(tái)開發(fā)的試劑盒具有較高的靈敏度，特異性，操作簡(jiǎn)單，速度快，非常適合現(xiàn)場(chǎng)快速基因檢測(cè)用途，該技術(shù)可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，林業(yè)，牧業(yè)，水產(chǎn)等領(lǐng)域的基因檢測(cè)、體外診斷、個(gè)性化用藥，遺傳分析，疾病診斷、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、生物安全檢測(cè)、病原微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)，動(dòng)物源性成分檢測(cè)，藥用植物真?zhèn)舞b定等領(lǐng)域。還可以用于急性傳染病和常見病原體流行病感染的早期分子診斷，有助于疾病的早期治療和防控，尤其是在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的地區(qū)，野外現(xiàn)場(chǎng)基因檢測(cè)，以及流行病爆發(fā)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)鑒定。

引物設(shè)計(jì):
RPA分析的關(guān)鍵在于擴(kuò)增引物和探針的設(shè)計(jì)。PCR引物多半是不適用的，因?yàn)镽PA引物比一般PCR引物長(zhǎng)，通常需要達(dá)到30-38個(gè)堿基。引物過(guò)短會(huì)降低重組率，影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度。在設(shè)計(jì)RPA引物時(shí)，變性溫度不再是影響擴(kuò)增引物的關(guān)鍵因素。RPA的引物和探針設(shè)計(jì)不像傳統(tǒng)PCR那樣成熟，用戶需要自己摸條件進(jìn)行優(yōu)化。

優(yōu)勢(shì):
常規(guī)PCR必須經(jīng)過(guò)變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的最適溫度在37℃-42℃之間，無(wú)需變性，在常溫下即可進(jìn)行。這無(wú)疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測(cè)。

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂幔ㄓ绕涫荄NA）模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)：

1. 對(duì)簡(jiǎn)單樣品，如全血，唾液，脫落細(xì)胞，游離細(xì)胞等，37-42℃恒溫?cái)U(kuò)增15-20min即可完成核酸擴(kuò)增和檢測(cè)。對(duì)于復(fù)雜樣品需進(jìn)行樣品前處理，加上核酸擴(kuò)增及檢測(cè)，整個(gè)過(guò)程也不超過(guò)30分鐘。而常規(guī)檢測(cè)方法都是現(xiàn)場(chǎng)采集，再長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)綄I(yè)實(shí)驗(yàn)室，最后還需專業(yè)人員檢測(cè)3-5小時(shí)。

2. 可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，林業(yè)，牧業(yè)，水產(chǎn)等領(lǐng)域的基因檢測(cè)、體外診斷、個(gè)性化用藥，遺傳分析，疾病診斷、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、生物安全檢測(cè)、病原微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)，動(dòng)物源性成分檢測(cè)，藥用植物真?zhèn)舞b定等領(lǐng)域。

3. 檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂崮０鍞U(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約10¹²擴(kuò)增產(chǎn)物。而且不需要復(fù)雜的樣品處理，適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。

4. 此技術(shù)既可以擴(kuò)增DNA也可以擴(kuò)增RNA，還省去了額外的cDNA合成步驟。不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)（凝膠電泳檢測(cè)），還可以對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控（實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)，速度最快！15-20min擴(kuò)增檢測(cè)出結(jié)果），甚至可以通過(guò)試紙條（側(cè)流層析試紙條）讀取結(jié)果。