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核酸電泳相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法

50×TAE Buffer  (pH8.5)

□組份濃度 2 MTris-醋酸，100 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。

Tris	242 g
Na2EDTA·2H2O	37.2 g

2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.加入57.1 ml的乙酸，充分?jǐn)嚢琛?

4.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。

10×TBE Buffer  (pH8.3)

□組份濃度 890 mMTris-硼酸，20 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。

Tris	108 g
Na2EDTA·2H2O	7.44 g
硼酸	55 g

2.向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。

10×MOPS(3-嗎啉基丙磺酸)Buffer 

□組份濃度  200 mM MOPS，20 mMNaOAc，10 mMEDTA

□配制量   1 L

□配制方法  

1.稱41.8 gMOPS，置于1 L燒杯中。

2.加約700 ml DEPC處理水，攪拌溶解。

3.使用2 N NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。

4.再向溶液中加入下列試劑。

1 MNaOAc(DEPC處理)	20 ml
0.5 MEDTA(pH8.0)(DEPC處理)	20 ml

5.用DEPC處理水將溶液定容至1 L。

6.用0.45 m濾膜過(guò)濾除去雜質(zhì)。

7.室溫避光保存。

注：溶液見(jiàn)光或高溫滅菌后會(huì)變黃。變黃時(shí)也可使用，但變黑時(shí)不要使用。

溴乙錠  (10 mg/ml)

□組份濃度  10 mg/ml溴乙錠

□配制量    100 ml

□配制方法  

1.稱量1 g溴乙錠，加入到100 ml容器中。

2.加入去離子水100 ml，充分?jǐn)嚢钄?shù)h完全溶解溴乙錠。

3.將溶液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫避光保存。

4.溴乙錠的工作濃度為0.5 ug/ml。

注意：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)，必須小心操作。

Agarose凝膠

配制方法  

1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。

2.根椐制膠量及凝膠濃度，準(zhǔn)確稱量瓊脂糖粉，加入適當(dāng)?shù)腻F形瓶中。

3.加入一定量的電泳緩沖液(總液體量不宜超過(guò)錐形瓶的50%容量)。

   注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。

4.在錐形瓶的瓶封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過(guò)程中，當(dāng)溶液沸騰后，請(qǐng)戴上防熱手套。小心搖動(dòng)錐形瓶。使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重復(fù)數(shù)次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，每次當(dāng)溶液起泡沸騰時(shí)停止加熱，否則會(huì)引起溶液過(guò)熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準(zhǔn)，也會(huì)損壞微波爐。熔化瓊脂糖時(shí)，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否則，會(huì)造成電泳圖像模糊不清。

5.使溶液冷卻至60℃左右，如需要可在此時(shí)加入溴乙錠溶液(終濃度0.5 μg/ml)。并充分混勻。

   注：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴乙錠的溶液時(shí)，請(qǐng)戴好手套。

6.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度  一般在3~5 min之間。

7.在室溫下使膠凝固(大約30 min~1 h)，然后放置于電泳槽中進(jìn)行電泳。

   注:凝膠不立即使用時(shí),請(qǐng)用保鮮膜將凝膠包好后在4℃保存,一般可保存2~5天。

瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最佳分辨范圍

瓊脂糖濃度	最佳線形DNA分辨范圍(bp)
0.5%     0.7%     1.0%     1.2%     1.5%     2.0%	1,000~30,000     800~12,000     500~10,000     400~7,000     200~3,000     50~2,000

6× Loading Buffer(DNA電泳用)

□組份濃度

30 mM	EDTA
36%(V/V)	Glycerol
0.05%(W/V)	Xylene Cyanol FF
0.05%(W/V)	Bromophenol Blue

□配制量    500 ml

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于500 ml燒杯中。

EDTA	4.4g
Bromophenol Blue	250 mg
Xylene Cyanol FF	250 mg

2.向燒杯中加入約200 ml的去離子水后，加熱攪拌充分溶解。

3.加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。

4.用去離子水定容至500 ml后，室溫保存。

10 × Loadlng Buffer(RNA電泳用)

□組份濃度

10 mM	EDTA
50%(V/V)	Glycerol
0.25%(W/V)	Xylene Cyanol FF
0.25%(W/V)	Bromophenol Blue

□配制置    10 ml

□配制方法  

1.稱量下列試劑，置于10 ml離心管中。

0.5 MEDTA(pH8.0)	200 μl
Bromophenol Blue	25 mg
Xylene Cyanol FF	25 mg

2.向離心管中加入約4 ml的DEPC處理水后，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

3.加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混勻。

4.用DEPC處理水定容至10 ml后，室溫保存。