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      你是不是和上面的師弟有相同的苦惱，搞不定RNA這個磨人的小妖精，經(jīng)常出現(xiàn)辛辛苦苦提的RNA又降解了，質(zhì)檢又沒通過的情況。為什么提的RNA總是不合格？ 今日作為師姐的小編就給我們整理一下RNA提取時的注意事項，輕松幫你搞定傲嬌的RNA分子，So easy~

為什么RNA易降解？

RNA簡略降解有內(nèi)因也有外因，從本身結(jié)構來說RNA是單鏈分子，本身很不安穩(wěn)，別的RNA分子2’方位上有游離的羥基，易構成2’，3’-環(huán)形磷酸鹽中心產(chǎn)品，易分化。從外因來看RNase無處不在，并且RNase本身熱安穩(wěn)性高、不簡略失活。RNase就像堅強的小強，怎樣打都不死。

RNA提取注意事項:

1、資料的取用與保存：

取用準則：“現(xiàn)用現(xiàn)取”，資料離體后趕快進行RNA提取。
保存條件：液氮、-80℃冰箱、干冰。
保存作用：液氮> -80℃冰箱>干冰。
樣品分裝：按試驗需求最小量保存多份，防止重復凍融。

2、試驗器具使用：

在RNA提取進程中但凡與RNA接觸到的器皿都必須是RNase-free的，具體可通過以下兩種辦法取得：
DEPC處理失活RNase：用含有DEPC的水浸泡試驗器皿失活RNase，然后進行高溫滅菌。

直接購買RNase-free的試驗耗材：適用于經(jīng)費足夠的試驗室，定心可靠。

3、提取辦法挑選：

RNA提取最常用的是TRIzol法和試劑盒法，二者各有好壞，可根據(jù)研討意圖進行挑選。

試劑盒法：
長處：操作簡略、入門簡略，新手必備。

缺陷：柱提取法提取的RNA有長度的局限性, 小RNA在提取進程中簡略丟掉。別的，不同的試劑盒適用物種不同，使用時需謹慎挑選。

TRIzol法：
長處：提取成本低，適用物種廣泛，操作者可根據(jù)不同試驗資料的特色靈敏調(diào)整試驗進程達到最優(yōu)的提取作用，適用于經(jīng)驗豐富的科研老司機。

缺陷：操作進程繁瑣、耗時長。

4、試驗人員操作：
提取RNA時應配戴口罩和手套，防止皮膚上的RNase污染樣品。
試驗進程遵循操作快、加樣準的準則。
主張?zhí)崛〗?jīng)驗不足的試驗人員防止一次性操作幾十個RNA樣品，簡略造成不同樣品間的平行性差別的，操作時刻添加也會添加RNA降解的危險。

5、RNA試驗環(huán)境建立：

最好建立RNA專用的試驗環(huán)境包含試驗臺和離心機等，削減不同試驗環(huán)境下RNase的穿插污染。
防止將RNA長時刻暴露于高溫環(huán)境。通常情況下，RNA 分子本身常常發(fā)作折疊構成安穩(wěn)二級結(jié)構，防止被降解，高溫環(huán)境有助于RNA分子二級結(jié)構的翻開，使RNA變得不安穩(wěn)，因而要防止。